El acervo de Referencia de la Biblioteca Nacional tiene cerca de ocho mil títulos y es la única que ofrece al usuario el acceso libre a los estantes, en los cuales las obras están organizadas por temas. Es un acervo diversificado que cubre todas las áreas del conocimiento, estando compuesto principalmente por enciclopedias - nacionales y extranjeras - y diccionarios.
Entre los diccionarios destacan los modernos y antiguos de la lengua portuguesa, como el Diccionario da Lingua Portugueza elaborado por el sacerdote Rafael Bluteau (1789). También están disponibles para consulta una gran variedad de diccionarios en áreas como:
- biografias
- política
- economía
- pseudónimos
- idiomas y dialectos
- ciencias sociales
- folclore brasileño
- astronomía y astronáutica
- medicina
- religión
- especialidades farmacéuticas (DEF)
- botánica, como el Dicionário das plantas úteis do Brasil e das exóticas cultivadas de Manoel Pio Corrêa.
También destacan en el acervo de Referencia piezas como Biblias, atlas, guías turísticas - tanto nacionales como internacionales - constituciones brasileñas, índices bio-bibliográficos y diccionarios y enciclopedias en áreas tales como:
- cine
- gastronomía y nutrición
- deportes
- historia de países, estados, ciudades y barrios, etc.
- literatura nacional y extranjera
- pintura
- teatro
- televisión
Es de destacar la disponibilidad de obras como la Enciclopédia Saraiva do Direito, diccionarios sobre el Rio Antiguo, la Enciclopédia dos Municípios Brasileiros, y el Dicionário das Famílias Brasileiras, entre otros.
En la Sección de Referencia el lector recibe asesoramiento sobre la investigación que esté realizando, siendo remitido a otros sectores de la Biblioteca Nacional, e incluso a otras bibliotecas y colecciones que pueden resultar de ayuda.